操作流程示意:
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犬雌二醇ELISA檢測試劑盒品牌產品別名:犬雌二醇(E2)ELISA檢測試劑盒 價格低,質量有保證。產品種類多,主要包括:人,大鼠,小鼠,兔,豬,犬,雞,猴,牛,馬,植物等ELISA試劑盒 英文名稱:Canine Estradiol,E2 ELISA Kit 規(guī)格: 48T/96T。
產品名稱 | 英文名稱 | 價格 |
犬雌二醇ELISA檢測試劑盒品牌 | Canine Estradiol,E2 ELISA Kit | 來電可享受優(yōu)惠 |
組成:
(1)犬雌二醇ELISA檢測試劑盒品牌結合物及標本的稀釋液;
(2)洗滌液,在板式ELISA中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;
(3)酶標記的抗原或抗體(結合物);
(4)酶的底物;
(5)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),elisa試劑盒參考標準品和控制血清(定量測定中);
(6)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑)
樣本處理及要求:
1. 犬雌二醇ELISA檢測試劑盒品牌血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。
仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。
2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?/span>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟:
1、犬雌二醇ELISA檢測試劑盒品牌標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,依次進行稀釋數倍。
2、加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4、配液:將30倍(48T 的20 倍)濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6、加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7、溫育:操作同3。
8、洗滌:操作同5。
9.在確保酶標板底無水滴及孔內無氣泡后,立即用酶標儀在 450nm 波長測量各孔的光密度 (O.D. 值)。
10、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
11、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
12、測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
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