實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國(guó)內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究,作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
產(chǎn)品名稱 | 生長(zhǎng)特性 | 貨號(hào) |
樹鼩胎心成纖維樣細(xì)胞;TS-EH-1 | 貼壁生長(zhǎng) | EY-X63883 |
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細(xì)胞名稱 樹鼩胎心成纖維樣細(xì)胞;TS-EH-1
形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性: 該細(xì)胞系來源于一雄性樹鼩胚胎的心臟組織,2010年由中科院昆明細(xì)胞庫建立。
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:2傳代;3-4天一次
傳代情況: P2
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 熒光法(-)
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來,吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長(zhǎng),未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細(xì)胞,盡量去除細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
70kDa熱休克蛋白8檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人慢性髓系白血病細(xì)胞;K562形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣;圓形Heat Shock 70 KDa Protein 8
百日咳桿菌檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人導(dǎo)管癌細(xì)胞;ZR-75-30形態(tài)特性: 上皮樣Bordetella pertussis
抗卵細(xì)胞透明帶抗體檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞;MEG-01形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Anti zona pellucida antibody
抗腎上腺皮質(zhì)抗體檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤;WERI-Rb-1形態(tài)特性: 圓形細(xì)胞聚集成葡萄狀A(yù)nti adrenal cortex antibody
炭疽桿菌IgM抗體檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人前列腺癌細(xì)胞;DU145[DU145;DU-145]形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞anthracis IgM antibody
β烯醇酶檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞;SW-13形態(tài)特性: 上皮樣;多角Beta-enolase
抗甲狀腺抗體檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人膀胱移行細(xì)胞癌;UM-UC-3形態(tài)特性: 上皮樣;多角Anti-thyroid antibodies
白介素1可溶性受體檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人滑膜肉瘤細(xì)胞;SW982形態(tài)特性: 多角Interleukin 1 soluble receptor
百日咳IgM抗體檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤;U-118MG形態(tài)特性: 混合形PT-IgM antibody
保羅樣激酶檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人膀胱移行細(xì)胞瘤細(xì)胞;RT4形態(tài)特性: 多角Polo-like kinase
尿泛素-核糖體融合蛋白52檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人膀胱移行細(xì)胞癌;SW780[SW-780,SW780]形態(tài)特性: 上皮樣;多角Ubiquitin A 52 Residue Ribosomal Protein Fusion Product 1
淋球菌抗體檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人急性淋巴母細(xì)胞性白血病細(xì)胞;MOLT-4形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞Neisseria gonorrhoeae antibody
EB病衣殼抗原IgG抗體檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞;K7M2wt[K7M2-WT]形態(tài)特性: Epstein-Barr Virus Capsid Antigen IgG antibody
EB病衣殼抗原IgM抗體檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 大鼠骨髓瘤細(xì)胞;Y3-Ag1.2.3形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Epstein-Barr Virus Capsid Antigen IgM antibody
EB病核抗原檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 小鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞;Y1形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣Epstein-Barr viral nuclear antigen
大腸桿菌宿主殘留蛋白檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人肺癌細(xì)胞(大細(xì)胞肺癌);NCI-H460形態(tài)特性: 上皮樣Escherichia coli Protein
視網(wǎng)膜劈裂蛋白檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: BALB/c小鼠胚胎細(xì)胞;BALB/c3T3cloneA31形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣Retinoschisin
樹鼩胎心成纖維樣細(xì)胞;TS-EH-1白綿馬素AA3570-40-9英文名:Albaspidin AA
英文別名:,5-Cyclohexadien-1-one,2,2'-methylenebis[6-acetyl-3,5-dihydroxy-4,4-dimethyl-
CAS登錄號(hào):3570-40-9
分子式:C21H24O8
分子量:404.15
分子結(jié)構(gòu):
外觀:無色針狀結(jié)晶
規(guī)格:20 mg/支
純度:≥ 98%
用途:用于含量測(cè)定/鑒定/藥理實(shí)驗(yàn)等。
提取來源:鱗毛蔗科粗莖鱗毛蕨Dryopteris crassirhizoma Nakai. 的根莖
溶解性:可溶于DMSO、熱,不溶于。
熔點(diǎn):167-169℃
藥理藥效:抗菌、抗病、抗腫瘤。
貯存條件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年