公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究,作為實驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
胚肺成纖維細(xì)胞;WI-38[WI38] | 貼壁生長 | EY-X63365 |
細(xì)胞名稱 胚肺成纖維細(xì)胞;WI-38[WI38]
形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: LeonardHayflick建系;有限傳代細(xì)胞系;壽命為50±10代(倍增時間24h);來自妊娠3個月的正常胚胎肺組織。該細(xì)胞系是個用于人疫苗制備的;培養(yǎng)基中添加TNFα可以加快細(xì)胞生長。
培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS;1%NEAA
傳代方法: 1:2~1:4傳代;2~3天換液1次。
傳代情況: P19
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養(yǎng)法(-)
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冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
IF4G7-NOGO拉丁屬名: Escherichia albertii4'-二甲基氨基苯乙酮Human SMAGP ELISA Kit
抗人EIFIAY單抗雜交瘤;B4B5C5拉丁屬名: Staphylococcus haemolyticus4'-二甲基氨基苯乙酮Human SMC5 ELISA Kit
抗人pirin單抗雜交瘤;IIIA3bC1E12D1拉丁屬名: Candida lipolytica var. lipolytica吲哚-4-羧酸Human SMC6 ELISA Kit
小鼠雜交瘤;1D9注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用吲哚-4-羧酸Human SMAP1 ELISA Kit
小鼠雜交瘤;3D10拉丁屬名: Candida guilliermondii吲哚-4-羧酸Human SMCHD1 ELISA Kit
小鼠雜交瘤;IIID12-G7拉丁屬名: Marinobacter psychrophilus2,3,5-三氯苯酸Human SMAP2 ELISA Kit
小鼠雜交瘤;1D5H12F11F8注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用Ramage 鏈接劑Human SMCR7/MID49 ELISA Kit
小鼠雜交瘤;1H7F8C12E5拉丁屬名: Flavobacterium hydatis乙酰乙酸基烯酸乙酯Human LMTK3(Serine/threonine-protein kinase LMTK3) ELISA Kit
抗人大腸癌單抗雜交瘤;CYL-5拉丁屬名: anatipestifer乙酰乙酸基烯酸乙酯Human SMARCA4 ELISA Kit
抗人大腸癌單抗雜交瘤;CYL-4用途: 研究(1S)-(+)-樟腦-10-磺酰氯Human SMCR7L ELISA Kit
抗人大腸癌單抗雜交瘤;CYL-3注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用(1S)-(+)-樟腦-10-磺酰氯Human SMARCC1 ELISA Kit
抗人大腸癌單抗雜交瘤;CYL-2拉丁屬名: Bacillus subtilis(1S)-(+)-樟腦-10-磺酰氯Human SMARCB1(SWI/SNF-related matrix-associated actin-dependent regulator of chromatin subfamily B member 1) ELISA Kit
小鼠雜交瘤;2E8E9E10F2拉丁屬名: Aspergillus tubingensis5-乙?;?2-甲氧基吡啶Human SMARCD1 ELISA Kit
小鼠雜交瘤;IF4B7拉丁屬名: Penicillium chrysogenum5-乙?;?2-甲氧基吡啶Human SLC5A3 ELISA Kit
小鼠雜交瘤;D7C5E2拉丁屬名:
胚肺成纖維細(xì)胞;WI-38[WI38]植物吲哚乙(IAA)ELISA試劑盒GSKELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
植物赤霉素(GA)ELISA試劑盒GSPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
植物玉米素核苷(ZR)ELISA試劑盒GSTpiELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
牛的牛小腸性磷酶(CIAP)ELISA試劑盒GSTsELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
牛膽(Cholicacid)ELISA試劑盒GTCELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
牛甘膽(CG)ELISA試劑盒GTE-AGEELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
牛血小板活化因子(PAF)ELISA試劑盒GuineapigLebtospiraIgGELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
牛瘦素(LEP)ELISA試劑盒Gzms-AELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來,吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時間過長,未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細(xì)胞,盡量去除細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。