公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究,作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
肺鱗癌細(xì)胞;NCI-H520 | 貼壁生長 | EY-X63355 |
細(xì)胞名稱 肺鱗癌細(xì)胞;NCI-H520
形態(tài)特性: 上皮樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 1982年GazdarAF等建系,源于鱗狀細(xì)胞肺癌組織;該細(xì)胞p53mRNA表達(dá)水平較正常肺組織低,但是沒有大的結(jié)構(gòu)DNA的異常。角蛋白、波形蛋白陽性,神經(jīng)絲三聯(lián)蛋白陰性;該細(xì)胞在軟瓊脂中可形成。
培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
傳代方法: 1:3~1:6傳代;2~3天換液1次。
傳代情況: C6
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養(yǎng)法(-)
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冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠雜交瘤細(xì)胞NC-4D12形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長Anti-CTGF Polyclonal Antibody
小鼠雜交瘤細(xì)胞株;2H4形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長Anti-ALOXE3 Polyclonal Antibody
腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞舒尼替尼耐藥株;ACSuR形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Anti-MT-CO2 Ponoclonal Antibody
歐洲鰻鱺肝臟細(xì)胞系;EL形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Anti-SPAG8 Polyclonal Antibody
小鼠雜交瘤細(xì)胞株;3B8形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長Anti-AFF4 Polyclonal Antibody
小鼠雜交瘤細(xì)胞株;4-F10形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長Anti-DSG1 Polyclonal Antibody
常肝細(xì)胞并芘轉(zhuǎn)化細(xì)胞系;HL-7702BaPT形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Anti-HSP90B1 Polyclonal Antibody
一種產(chǎn)生抗羅非魚無乳鏈球菌的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株;3A9形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 貼壁生長Anti-KIF1C Polyclonal Antibody
曲妥珠單抗(赫塞?。┠退幍娜税┘?xì)胞;BT-474/HR形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Anti-UCP3 Polyclonal Antibody
癌細(xì)胞株;Huh-7/M8形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Anti-NOSIP Polyclonal Antibody
小鼠雜交瘤細(xì)胞株;2B11形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長Anti-GOT1 Polyclonal Antibody
小鼠雜交瘤細(xì)胞株;PP65形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長Anti-HTR3A Polyclonal Antibody
癌細(xì)胞株;Huh-7/F24形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Anti-HFH4 Polyclonal Antibody
一種產(chǎn)生抗羅非魚無乳鏈球菌的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株;4C12形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 貼壁生長Anti-RSU1 Polyclonal Antibody
小鼠雜交瘤細(xì)胞株;FlounderIgM-H形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長Anti-IRAK4 Polyclonal Antibody
小鼠雜交瘤細(xì)胞株;IE1形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長Anti-AKAP8 Polyclonal Antibody
肺鱗癌細(xì)胞;NCI-H520大鼠白介素1(IL-1)ELISA試劑盒GHRPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠S100B蛋白(S-100B)ELISA試劑盒GHRPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠S100蛋白(S-100)ELISA試劑盒GHRPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISA試劑盒GHRPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA試劑盒GHRPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠Ⅰ型膠原(ColⅠ)ELISA試劑盒GHRPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠Ⅱ型膠原(ColⅡ)ELISA試劑盒GHRPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒GHRP-GhrelinELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來,吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長,未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細(xì)胞,盡量去除細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。