實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細胞廣泛用于國內院校的細胞生物學研究,作為實驗項目研究。下列產品詳細介紹:
產品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
肺癌細胞;907 | 貼壁生長 | EY-X63986 |
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細胞名稱 肺癌細胞;907
形態(tài)特性: 上皮細胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細胞屬保藏,其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件: McCoy's5AMedia(ModifiedwithTricine)10%FBS
傳代方法: 1:3~1:8傳代;每周2~8次。
傳代情況: C5
凍存條件: 基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 陰性
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
角化細胞內分泌因子檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSkeratinocyte autocrine factor;Amphiregulin
靜止素Q6硫基氧化酶1檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSSulfhydryl oxidase 1
靜止素Q6硫基氧化酶2檢測試劑盒生長特性: 貼壁生長培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)新生牛血清,10%Sulfhydryl oxidase 2
巨噬細胞炎性蛋白3β檢測試劑盒生長特性: 貼壁生長培養(yǎng)條件: DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)新生牛血清,10%Macrophage Inflammatory Protein 3β
巨噬細胞炎癥蛋白1β檢測試劑盒生長特性: 貼壁生長培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)新生牛血清,10%macrophage inflammatory protein 1β
抗IgE受體抗體檢測試劑盒生長特性: 貼壁生長培養(yǎng)條件: F12K新生牛血清,10%IgE receptor-Ab
抗L型鈣通道蛋白抗體檢測試劑盒生長特性: 貼壁生長培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)新生牛血清,10%;水解乳蛋白,10%Anti-CAA1C;Anti-CACH2;CaV1.2
抗N-甲基-D-天冬氨受體抗體檢測試劑盒生長特性: 貼壁生長培養(yǎng)條件: F12K新生牛血清,10%N-methyl- D-aspartate receptor antibody
抗甲狀腺微粒體抗體檢測試劑盒生長特性: 懸浮生長培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)新生牛血清,10%Anti-Thyroid Microsome Antibody
抗透明帶抗體檢測試劑盒生長特性: 貼壁生長培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)新生牛血清,10%anti-zona pellucida antibody
抗小核糖核蛋白;Sm抗體檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)新生牛血清,10%small nuclear ribonucleoprotein
抗心磷脂IgA抗體檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)新生牛血清,10%anti-cardiolipin antibody IgA
抗心磷脂IgM抗體檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)新生牛血清,10%anti-cardiolipin antibody IgM
抗血小板IgG抗體檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)新生牛血清,10%platelet antibodies IgG
抗中性粒細胞抗體檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)新生牛血清,10%anti-neutrophil antibody
可溶性CD44V6檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)新生牛血清,10%sCD44v6
可溶性CD86檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)新生牛血清,10%sCD86
肺癌細胞;907異土木香內酯470-17-7中文別名:異阿蘭內酯
英文名:Isoalantolactone
CAS登錄號:470-17-7
分子式:C15H20O2
分子量:232.31
分子結構:
外觀:無色針晶()
規(guī)格:20mg/支
純度:≥ 98%
用途:用于含量測定/鑒定/藥理實驗等。
提取來源:菊科植物土木香 Inula helenium L.根,藏木香I.Racemosa Hook.F.等。
溶解性:溶于乙醇、、和,不溶于水。
熔點:112-113℃
藥理藥效:1.驅蟲作用異土木香內酯的藥理作用與山道年相似,以驅蟲作用為主。對豬和貓的蛔蟲異土木香內酯和土木香內酯的混合物對Australorbis glabratus有很強的性和滅殺作用。有強的抗原蟲作用,體外0.24~7.8ug/ml 對痢疾阿米巴和******************毛滴蟲有效。 2.抗菌作用體外抗皮膚真菌試驗,對須癬毛菌、大小孢菌有明顯的抑制作用,作用強度與制菌霉素相當,而遜于;低抑制濃度,對表皮癬菌為35ug./ml,對須發(fā)癬菌為25ug/ml,對尖發(fā)癬菌為15ug/ml;對豚鼠感染須發(fā)癬菌的體內試驗,1.5%異土木香內酯油膏有很好的治療作用。還有很強的抗結核桿菌和其他微生物的作用。 3.其他作用異土木香內酯與土木香內酯的混合物,家兔注射0.1g/kg以上,明顯降低尿中硫鹽的量,而對氮排泄沒有影響。 [性]小鼠皮下注射小致死量為200mg/kg,性比山道年小。
貯存條件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年