綜合微生物的培養(yǎng)方法,包括以下步驟:
(1)前期準(zhǔn)備:(A)滅菌處理;(B)制備Biolite水;(C)檢查設(shè)備和材料;
(2)按比例配制培養(yǎng)材料;
(3)導(dǎo)入曝氣,進(jìn)行繁殖培養(yǎng);
(4)取液觀察;(a)取液;(b)稀釋菌液;(c)平板培養(yǎng);
(5)分離并檢測(cè);
(6)取液儲(chǔ)存;通過(guò)該綜合微生物培養(yǎng)方法簡(jiǎn)單可操作性強(qiáng),培養(yǎng)的綜合微生物均在3代以內(nèi),菌類(lèi)穩(wěn)定不發(fā)生突變,且繁殖快速。
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規(guī)格參數(shù):
產(chǎn)品名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 貨號(hào) |
莫拉卡他莫拉菌 | Moraxella | EY-J963671 |
資源名稱(chēng): 莫拉卡他莫拉菌
種屬: Moraxella catarrhalis
提供形式: 凍干粉
安全等級(jí): 1
模式菌株: yes
應(yīng)用領(lǐng)域: 質(zhì)控菌;BBL的質(zhì)控菌株;bioMerieuxVitekproducts
培養(yǎng)基: 腦心浸液瓊脂(BHIA):牛腦浸粉 4.0g,牛心浸粉 4.0g,蛋白胨 5.0g,酪蛋白胨16.0g,NaCl 5.0g,葡萄糖 2.0g,二氫鉀氫二鈉 2.5g,瓊脂 20.0g,pH7.4 ± 0.2。121℃,15min。
生長(zhǎng)條件: 37℃,5%CO2
低溫存法:
①簡(jiǎn)單保存法,將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存,保存時(shí)間不超過(guò)1~2個(gè)月,若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時(shí)間可達(dá)3~4個(gè)月;②液氮超低溫保存法,將生長(zhǎng)穩(wěn)定期的細(xì)胞懸浮在10%甘油或其他低冰點(diǎn)液體中,密封于安瓿管內(nèi),然后控制冷卻速度,使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時(shí),即可置于-150~-196℃的液氮罐中保存。大多數(shù)微生物如病毒、噬菌體、多種細(xì)菌、放線菌、酵母和原蟲(chóng)、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物,都可用此法保存。
微生物菌種的培養(yǎng):
⒈ 孢子制備
⑴ 放線菌孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分,如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無(wú)機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1%,氮源不超過(guò)0.5%),碳源豐富容易造成酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境,不利于放線菌孢子的形成,氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下,干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃,少數(shù)為37 ℃,培養(yǎng)時(shí)間為5~14天。
⑵ 霉菌孢子的制備
霉菌的孢子培養(yǎng),一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖,而且這類(lèi)培養(yǎng)基的表面積較大,可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25~28 ℃,培養(yǎng)時(shí)間為4~14天。
⒉ 種子制備
⑴ 搖瓶種子制備
搖瓶種子進(jìn)罐,常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng),有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*,并易被菌體分解利用,氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)濃,子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高,更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。
⑵ 種子罐種子制備
種子罐種子制備的工藝過(guò)程,因菌種不同而異,一般可分為一級(jí)種子、二級(jí)種子和三級(jí)種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中,經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲,這樣的種子稱(chēng)為一級(jí)種子,把一級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱(chēng)為二級(jí)發(fā)酵。如果將一級(jí)種子接入體積較大的種子罐內(nèi),經(jīng)過(guò)培養(yǎng)形成更多的菌絲,這樣制備的種子稱(chēng)為二級(jí)種子,將二級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱(chēng)為三級(jí)發(fā)酵。同樣道理,使用三級(jí)種子的發(fā)酵,稱(chēng)為四級(jí)發(fā)酵。
Mycoplana│sp. 中文名稱(chēng):枝面菌Mycoplana│sp.分離基物:沉積物/熱液區(qū)硫化物提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:1、海洋石油污染生物修復(fù); 2、生物活性物質(zhì)篩選。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:821生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:98%
Halomonas│salaria 中文名稱(chēng):鹽漬鹽單胞菌Halomonas│salaria分離基物:沉積物/熱液區(qū)深海沉積物提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:1、海洋石油污染生物修復(fù); 2、生物活性物質(zhì)篩選。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:821生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:98%
Novosphingobium│sp. 中文名稱(chēng):新鞘氨醇菌Novosphingobium│sp.分離基物:沉積物/土灰色沉積物10-12cm提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:有機(jī)污染物降解菌/多環(huán)芳烴(PAHs)降解菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:821生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:平均分子量 ~200,含80 - 120 ppm MEHQ 穩(wěn)定劑
Novosphingobium│indicum 中文名稱(chēng):印度洋新鞘氨醇菌Novosphingobium│indicum分離基物:沉積物/土灰色沉積物上覆提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:有機(jī)污染物降解菌/多環(huán)芳烴(PAHs)降解菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:821生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:98%
Pseudomonas│pachastrellae 中文名稱(chēng):海綿假單胞菌Pseudomonas│pachastrellae分離基物:沉積物/土灰色沉積物13-15cm提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:1、海洋石油污染生物修復(fù); 2、生物活性物質(zhì)篩選。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:821生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:98%
Sphingopyxis│granuli 中文名稱(chēng):細(xì)粒鞘氨醇盒菌Sphingopyxis│granuli分離基物:沉積物/土灰色沉積物上覆提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:1、海洋石油污染生物修復(fù):芳烴生物降解; 2、生物活性物質(zhì)篩選。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:821生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:97%
Corynebacrium│rpenotabidum 中文名稱(chēng):解萜烯棒桿菌Corynebacrium│rpenotabidum分離基物:沉積物/深海沉積物提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:能夠降解石油,柴油等烷烴類(lèi)物質(zhì),可用于生物修復(fù)。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471生長(zhǎng)條件:25℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:97%
Bacillus│endophyticus 中文名稱(chēng):植物內(nèi)芽孢桿菌Bacillus│endophyticus分離基物:沉積物/表層沉積物提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:1.生物降解;2.生物催化;3.生物活性物質(zhì)篩選; 4.海洋微生物生態(tài)學(xué)研究。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:821生長(zhǎng)條件:25℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:98%
莫拉卡他莫拉菌RAR-Alpha 維甲受體-α 抗體莪術(shù)二5H-5-甲基-6,7-二氫環(huán)戊基吡Mouse IP-10/CXCL10 (Interferon Gamma Induced Protein 10kDa) ELISA Kit
RAR Beta 維甲受體β抗體氧化槐果五乙二單甲Mouse Cyt C (Cytochrome C) ELISA Kit
RASSF1A Ras相關(guān)區(qū)域家族1A抗體楊梅苷五乙二單甲Mouse DKK1 (Dickkopf Related Protein 1)ELISA Kit
Pan-ras Pan ras抗體人參皂苷Ro脲基三乙氧基硅烷Mouse EGF (Epidermal growth factor) ELISA Kit
RCC1 染色體濃縮調(diào)控蛋白1抗體灰氈毛忍冬皂苷乙四乙二單甲Mouse ESM1 (Endothelial Cell Specific Molecule 1) ELISA Kit
Phospho-RCC1 (Ser11) 磷化染色體濃縮調(diào)控蛋白1抗體銀杏內(nèi)酯J四乙二單甲Mouse EPO (Erythropoietin) ELISA Kit
Rb/RB1 protein 視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1抗體特女貞苷2-乙?;?3-甲基吡Mouse FASL (Factor Related Apoptosis Ligand) ELISA Kit
Phospho-Rb (Ser608) 磷化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1抗體京尼平苷2-乙?;?3-甲基吡Mouse FGF21(Fibroblast Growth Factor 21) ELISA Kit