樣本的收集操作不當(dāng)影響17羥孕酮Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)結(jié)果
17羥孕酮Elisa試劑盒以其靈敏度較高、特異性好的特點(diǎn)已廣泛用于科研實(shí)驗(yàn)及臨床,越來越多科研單位選擇用ELISA實(shí)驗(yàn)方法完成研究課題。的試劑、好的儀器和正確的操作是保證ELISA試劑盒檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件,但樣本的收集及保存操作不當(dāng)也會影響ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果。樣本的收集跟保存聽上去貌似很簡單,但不乏有許多科研工作者因?yàn)闃颖镜氖占4鏇]做好而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
下面針對樣本收集及保存江萊生物提幾點(diǎn)建議:
1.嚴(yán)重溶血,以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中,殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性,催化底物顯色造成假陽性;
2.混有紅細(xì)胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈;如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng):
3.標(biāo)本凝固不全,有時為了爭取時間快速檢測,常在血液還未開始凝固時即強(qiáng)行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結(jié)果;
4.采血試管洗滌不*、反復(fù)使用易交叉污染:塑料試管能吸附抗原物質(zhì),樣本久置在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。
血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測,嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃,標(biāo)本在冰箱中保存時間過長導(dǎo)致血清IgG聚合,使間接法的試劑本底加深。超過一周測定的需-20℃保存。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡?;鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測。反復(fù)凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存;使用一次性玻璃試管或真空管;并使用非抗凝標(biāo)本,肝素抗凝血漿會增加OD值,可能與高濃度肝素具有強(qiáng)大的負(fù)電荷能吸附酶標(biāo)記物不易洗脫有關(guān);EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性;血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清,或標(biāo)本采集時用帶分離膠的或于中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?/p>
被檢血清或血漿標(biāo)本,17羥孕酮Elisa試劑盒可用含保護(hù)性封阻劑(吐溫-20)或稱濕潤劑的緩沖液來稀釋。也可加入一些蛋白質(zhì),如1%牛血清白蛋白等來稀釋。然后再加到已經(jīng)用抗原或抗體包被的固相載體中進(jìn)行孵育。此種被試標(biāo)本可作一系列稀釋度測定,也可用一個稀釋度測定。對于作某一個傳染病的診斷來說,先用一系列稀釋度作一批標(biāo)本測定,求出對診斷有意義的一個稀釋度(即測定劑量反應(yīng)曲線),然后用一個稀釋測定即可。zui適稀釋度和孵育時間均需從實(shí)踐中摸索出來,對一般病原微生物所引起的傳染病的血清學(xué)診斷,以1:200稀釋度測定比較適當(dāng),而試驗(yàn)標(biāo)本的(即含抗體)作用時間一般為室溫或37℃ 1-2小時。但現(xiàn)在對有些標(biāo)本(如流腦抗原)測定時,僅用37℃ 5分鐘。對單克隆抗體檢測也可縮短作用時間。
規(guī)格: 100mg 171228-200602 檢查 *: 2-氨基-2’-氯-5-硝基二苯酮
規(guī)格: 50mg 171229-200603 含量測定 *: ▲
規(guī)格: 20mg *: ▲鹽酸愛康寧
規(guī)格: 20mg *: 鹽酸甲基愛康寧
規(guī)格: 20mg 171233-200606 含量測定 *: 苯甲酰愛康寧
17羥孕酮Elisa試劑盒
上一篇 選購輪狀病毒Elisa試劑盒的注意事項(xiàng) 下一篇 巨噬細(xì)胞炎性蛋白2Elisa試劑盒的存儲規(guī)則